II 试剂与耗材
—胶原母液（本产品Cat: LV-collagen003）
—超纯水
—醋酸母液
—0.22μm滤膜及50mL一次性注射器
—氢氧化钠（Sigma； Cat：S5881-500G）
—移液枪及枪头
—培养板/皿/瓶
—生物安全柜
—37℃/5%CO2培养箱
III 包被步骤
1. 在生物安全柜中 ，将5mL 醋酸母液加入到1L无菌水中配制成为醋酸工作液。
2. 加入I型鼠尾胶原母液，使终浓度为50μg/mL，即每100 mL醋酸工作液中加入5 mg胶原蛋白（对应胶原母液体积为V=5mg/10mg/mL=0.5mL），4℃保存待用（不超过3个月）。
3. 将胶原工作液以大于/等于5μg/cm2的包被量加入到需要包被处理的培养板/皿/瓶中，通常情况下，加入工作液为推荐培养基（见附表）使用体积的60%，如12孔板的培养基推荐使用体积为1 mL，加入0.6 mL胶原工作液即可达到饱和。
4. 生物安全柜中，常温孵育1h。延长包被时间至3小时，对后续细胞培养没有影响。
5. 将胶原工作液吸出，生物安全柜中自然晾干，封口膜封口，4℃保存不超过6个月。
6. 接种细胞前，胶原包被培养板/皿/瓶需PBS或培养基清洗一次，以去除残留的醋酸。
IV 成胶步骤
1. 准备1M NaOH、10×PBS或10×DMEM以及超纯水，过滤除菌后于冰上预冷。
2. 成胶溶液的各成分添加量与配置方法：
2.1 10×PBS或10×DMEM的添加量为最终体积的1/10mL。
2.2 胶原添加量为：
终体积×胶原终浓度（mg/ml） | =胶原添加量（mL） |
胶原母液浓度（10mg/mL） |
2.3 NaOH添加量为：
胶原添加量×0.015μL=1M NaOH添加量（μL）
2.4 灭菌水的添加量：
终体积-胶原添加体积-NaOH添加体积-10×PBS或10×DMEM体积=超纯水添加量（mL）
3. 将10×PBS或10×DMEM和NaOH溶液以及超纯水混合均匀至于冰上。
4. 将胶原加入混合液中充分混匀，然后立即使用。
5. 使用时可根据实验需求直接铺板，放入37℃孵育30min待胶凝固即可使用.
Ⅵ 参考文献
(1) Linsley, C., Wu, B. & Tawil, B. The effect of fibrinogen, collagen type I, and fibronectin on mesenchymal stem cell growth and differentiation into osteoblasts. Tissue engineering. Part A 19, 1416-1423, doi:10.1089/ten.TEA.2012.0523 (2013).
(2) Sawada, N. et al. Effects of extracellular matrix components on the growth and differentiation of cultured rat hepatocytes. In vitro cellular & developmental biology : journal of the Tissue Culture Association 23, 267-273 (1987).
附表.培养板/皿/瓶参数与液体加入推荐量
培养板 | 培养面积（cm2） | 高度（带盖mm） | 推荐培养液量/ mL |
6W | 9.5 | 23 | 2 |
12W | 3.6 | 23 | 1 |
24W | 1.9 | 23 | 0.5 |
48W | 0.88 | 23 | 0.3 |
96/96U/96V | 0.32 | 16 | 0.1 |
384W | 0.1135 | 16 | 0.033 |
35mm | 8.5 | 12 | 2 |
60mm | 22.9 | 15 | 5 |
100mm | 57.6 | 20 | 10 |
150mm | 150.1 | 25 | 25-30 |
T25 | 25 | 20 | 5 |
T75 | 75 | 35 | 10 |
T175 | 175 | 40 | 30
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V Customer Service
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