科研产品

I 简介

I型鼠尾胶原是重要的细胞外基质，可促进细胞贴壁、维持细胞分化状态。我们的产品是从SD大鼠尾腱中提取分离，在万级实验室中经过多道工序提纯获得的，保持了胶原蛋白的生物活性。经测试，本产品pH调至中性后可成胶，可用于多种原代细胞的细胞培养，例如肝细胞、血管内皮细胞、间充质干细胞、胰岛beta等细胞。

II 试剂与耗材

—胶原母液（本产品Cat: LV-collagen003）               

—超纯水

—醋酸母液

—0.22μm滤膜及50mL一次性注射器                                             

—氢氧化钠（Sigma； Cat：S5881-500G）

—移液枪及枪头

—培养板/皿/瓶

—生物安全柜

—37℃/5%CO₂培养箱

III 包被步骤

1. 在生物安全柜中 ，将5mL 醋酸母液加入到1L无菌水中配制成为醋酸工作液。

2. 加入I型鼠尾胶原母液，使终浓度为50μg/mL，即每100 mL醋酸工作液中加入5 mg胶原蛋白（对应胶原母液体积为V=5mg/10mg/mL=0.5mL），4℃保存待用（不超过3个月）。

3. 将胶原工作液以大于/等于5μg/cm²的包被量加入到需要包被处理的培养板/皿/瓶中，通常情况下，加入工作液为推荐培养基（见附表）使用体积的60%，如12孔板的培养基推荐使用体积为1 mL，加入0.6 mL胶原工作液即可达到饱和。

4. 生物安全柜中，常温孵育1h。延长包被时间至3小时，对后续细胞培养没有影响。

5. 将胶原工作液吸出，生物安全柜中自然晾干，封口膜封口，4℃保存不超过6个月。

6. 接种细胞前，胶原包被培养板/皿/瓶需PBS或培养基清洗一次，以去除残留的醋酸。

IV 成胶步骤

1. 准备1M NaOH、10×PBS或10×DMEM以及超纯水，过滤除菌后于冰上预冷。

2. 成胶溶液的各成分添加量与配置方法：

2.1  10×PBS或10×DMEM的添加量为最终体积的1/10mL。

2.2  胶原添加量为：

2.3  NaOH添加量为：

胶原添加量×0.015μL=1M NaOH添加量（μL）

2.4  灭菌水的添加量：

终体积-胶原添加体积-NaOH添加体积-10×PBS或10×DMEM体积=超纯水添加量（mL）

3. 将10×PBS或10×DMEM和NaOH溶液以及超纯水混合均匀至于冰上。

4. 将胶原加入混合液中充分混匀，然后立即使用。

5. 使用时可根据实验需求直接铺板，放入37℃孵育30min待胶凝固即可使用.

Ⅵ 参考文献

(1) Linsley, C., Wu, B. & Tawil, B. The effect of fibrinogen, collagen type I, and fibronectin on mesenchymal stem cell growth and differentiation into osteoblasts. Tissue engineering. Part A 19, 1416-1423, doi:10.1089/ten.TEA.2012.0523 (2013).   

(2) Sawada, N. et al. Effects of extracellular matrix components on the growth and differentiation of cultured rat hepatocytes. In vitro cellular & developmental biology : journal of the Tissue Culture Association 23, 267-273 (1987).

附表.培养板/皿/瓶参数与液体加入推荐量

特殊说明

1. 本产品为冷藏发货，收货后可能为部分液体或者液体状态（确保仍然低温），属于正常状态。

2. I型鼠尾胶原母液储存在-20℃。避免多次冻融，建议根据需求量进行分装后冻存。

3. 本产品为无菌液体，请放心使用，无需过滤。

4. 胶原工作液可重复利用2-3次，但需避免因多次包被而造成可能的污染，如怀疑存在污染，请立即放弃使用。

5. 成胶时只需把终溶液调成中性即可，添加NaOH的量可能会有误差，可和水的添加量进行调整。

6. 各成分溶液添加混合顺序可互换，但是要保证不可将NaOH加入胶原溶液中，只可以将胶原溶液加到NaOH溶液中，避免出现因NaOH不能迅速混匀而产生局部凝胶的情况。

Ⅴ 联系方式

公司电话：0755-28284050

  技术支持：19902901483（周博士）