运输方式
液氮运输
1、吸附式液氮运输，无游离液氮，冒白烟即说明正常。
2、温度监测设备严密监控运输过程中的罐内温度，如发现异常可拷贝温度记录仪上的PDF和excel数据（温度监测设备一头可拔掉，显示USB接头，插入电脑即可拷贝数据，如遇到困难，可联系销售人员和技术支持解决）。
3、合金密码锁，保证从发出到收货，没有第三方可以打开液氮罐接触细胞，保护细胞安全。
4、GPS定位器，细胞运输轨迹全程掌握，防止丢件。
5、液氮罐、温度监测设备、合金密码锁、GPS定位器为回收部件，请妥善保管，禁止破坏，否则会被拉入黑名单。
文章引用
略
适用范围
小鼠CD19阳性B细胞广泛用于免疫研究，包括自身免疫病、免疫缺陷及B细胞恶性肿瘤（如白血病、淋巴瘤）模型构建；评估靶向疗法（如CAR-T、抗体药物）效果，并探究B细胞发育、信号通路及免疫功能调控机制。
I 试剂与材料
Ø 冻存CD19阳性B细胞（Cat# LV-Bcell001/002）
Ø 培养基（完全RPMI1640，见下表）
Ø 37℃恒温水浴锅
Ø 生物安全柜
Ø 15ml离心管
Ø 37℃/5% CO2培养箱
Ø 宽口滴管和宽口移液枪头
Ø 移液枪
Ø 75%酒精
II 完全RPMI1640培养基
成分 | 用量 |
不完全RPMI1640溶液 | 500ml |
左旋谷氨酰胺（L-Glu） | 2mM |
2-巯基乙醇（2-ME） | 50μM |
青霉素(Penicillin) | 100U/ml |
链霉素(Streptomycin) | 100μg/ml |
FCS(56℃灭活30min) | 50ml |
特别提醒：复苏培养基中补加300mM葡萄糖，可提升细胞活力及活细胞数。
III 细胞的复苏与铺板
重要提示：解冻时，冻存细胞转移必须使用液氮转移；在整个复苏实验过程中必须全程使用宽口枪头。
1. 完全RPMI1640培养基放入37℃恒温水浴锅中让其充分预热。
2. 将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至37℃恒温水浴锅中。将冻存管尽可能多的浸入37℃水中，作规律的水平摇动，但必须确保冻存管盖子保持在水面以上。
3. 解冻冻存管至刚好完全溶解成液体，约90-120秒，。
4. 用75%酒精对冻存管消毒，并将其转移到生物安全柜。
5. 小心地将解冻后的细胞吸出，移至15ml离心管，并用培养基润洗一遍冻存管及吸取细胞的枪头。
6. 一边摇晃离心管，一边加入完全RPMI1640培养基至12ml（注意：前3ml要缓慢逐滴加入并摇晃，后面9ml可加快速度），最后上下颠倒混匀。
7. 20℃，650g，升速7，降速4，离心5min。
8. 弃上清，加入3ml完全RPMI1640培养基重悬细胞，并用台盼蓝染色计数（V细胞悬液：V0.4%台盼蓝=9：1，细胞活率使用血球计数板手工计数，勿用细胞计数仪；细胞总数使用细胞计数仪计数）测定细胞的活力、细胞总数，建议细胞总数检测3次，求取平均值；为节约时间，细胞活率检测1次。
9. 按实验要求的密度进行铺板。
在37℃/ 5% CO2培养箱中培养。
细胞复苏后不能再冻存，再冻存影响细胞的功能与状态。
IV 关于售后
如您发现产品有任何质量问题，请您收集原始数据，并第一时间联系公司销售或者技术支持，公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同，操作人员习惯不同，熟练程度不一样，实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限，公司不做售后，请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据：
复苏问题：立刻报告异常；提供台盼蓝染色或者AO/PI染色。
污染问题：复苏96小时以内；提供相差显微镜照片。
纯度问题：一个月内；提供免疫荧光或者流式结果。
V 联系电话
公司电话：0755-28284050
技术支持：19902901483（周博士）
